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本产品是一种高效的高产膜蛋白提取试剂盒，可以从各种菌体中提取跨膜蛋白，可用于纯化蛋白的粗品制备及膜蛋白制备。提取过程简单方便，本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组份，试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高质量的蛋白提供了保证。

本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。

本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯合层析等下游应用兼容。本试剂盒提取的蛋白样本含高浓度盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用其他货号试剂盒(HR0169)。也可将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理(HR0389)。

• 使用方便，从细菌中提取蛋白不需经过超声破碎等前处理。
  
• 将蛋白提取的时间缩短至1小时。
  
• 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
  
• 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
  
• 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
  
• 本品可用于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
  
• 本品不含EDTA，可以用于金属螯合层析等下游应用。

• 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2～8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
  
• 蛋白酶抑制剂在2～8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

• 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
  
• 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
  
• 蛋白酶抑制剂在2～8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
  
• 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

• 提取液的制备：
  每500μL冷的抽提液A中加入5μL提取液B和2μL蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。
  注：
  ● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
  ● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
  ● 蛋白样品用于测定某些蛋白酶活性等下游实验时，注意根据实际情况调整抑制剂混合物是否加入。
  
• 离心收集菌体，用PBS洗菌体2次。
  
• 按每100～150mg湿重菌体样本加入500μL冷的抽提液A(大约菌体和提取液体积比1:3～1:5，完全淹没菌体即可)，吹打混匀，在2～8℃振荡1～2小时，至菌体裂解完全，液体澄清，菌体沉淀减少。
  注：
  ● 必须在2～8℃条件下振荡，不可以室温振荡。
  ● 用振荡器/摇床的较低转速，保持液体稍微晃动即可。可以盖紧离心管，将离心管倾斜放置或横置，以利于液体振荡。
  ● 如果无2～8℃持续振荡条件，也可直接置2～8℃冰箱静置1～2小时，中间每隔10分钟涡旋振荡混匀即可。
  ● 如果有超声条件，可以做40-300W，超声5s/间隔5s条件下超声几分钟，至澄清。
  
• 将菌液在2～8℃低温下12000×g离心5分钟，取上清。
  
• 在37℃水浴10分钟。
  
• 在37℃ 1000×g离心3分钟。
  注：
  ● 此步骤必须37℃条件下离心。
  ● 如果离心机不可温控，可以不离心，延长上一步骤水浴时间，至溶液分层清晰即可。或者在室温条件下离心，缩短离心时间至1分钟。
  
• 此时液体分为2层，小心移除上层溶液，留管底部下层，大约50μL液体。
  注：
  ● 下层为粘稠状液体。
  ● 未完全分好层时看上去可能像3层，保留中间的界面层即可。
  
• 用1～2倍体积的膜蛋白溶解液溶解该溶液，即得细菌跨膜蛋白样品。
  
• 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
  注：
  ●建议用BCA法进行蛋白定量，相关产品HR0329。
  ●蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

• 蛋白浓度低？
  处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂C的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
  
• 用什么方法定量蛋白？
  建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂C中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
  
• 提取的蛋白具有活性吗？
  本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。